耶穌在客西馬尼園被捕，而使徒四散奔逃時，「有一個少年人，赤身披著一塊麻布，跟隨耶穌。」民衆企圖把他也拿住，「他卻丟了麻布，赤身逃走了。」一般人相信這個少年就是馬可。使徒行傳把他稱為「約翰（別名馬可）」
馬可有可能來自耶路撒冷一個富裕的家庭，因為他們擁有自己的房屋和僕婢。他的母親馬利亞也是個基督徒，早期會衆曾以她的住宅作為聚會地方。彼得蒙天使拯救出監之後，直接前往馬可家裏，他發覺弟兄們正在那裏聚集。
來自賽普勒斯的利未人巴拿巴是是馬可的表兄，透過把賑濟饑荒的捐款送到耶路撒冷時，馬可認識了保羅。在教會中和其他基督徒的交往以及和熱心服事的弟兄姊妹之接觸無疑，使馬可渴望加入海外傳宣教。因此，馬可在保羅和巴拿巴作第一次旅行佈道時與他們同形，成作他們的助手。不過，為了某些原因，馬可在旁非利亞的別加離開他們，自行返回耶路撒冷。
也因為這樣保羅在啟程作第二次旅行佈道時拒絶帶馬可同行，造成保羅與巴拿巴分道揚鑣。保羅與西拉結伴同行，巴拿巴則帶著表弟馬可乘船往賽普勒斯去。
馬可證明自己在服事上勝任愉快，不但成為巴拿巴的良助，後來也是使徒彼得和保羅的得力助手。保羅在羅馬（約公元60-61年）第一次被囚時，馬可與他在一起。（《腓利門書》第1節至第24節參）後來我們獲知馬可於公元62和64年之間在巴比倫與彼得一起。（彼得前書5：13）
保羅很可能在公元65年再度在羅馬被囚，他在寫給提摩太的信中囑咐後者把馬可帶來，説：「因為他在服事方面對我有幫助。」這是聖經記載最後一次提及馬可的地方。
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